Kalibrasyon Eğrisi
Veri Girişi
Bilinmeyen örnekler (isteğe bağlı)
Ne yapar?
Kalibrasyon standartlarına sıradan en küçük karelerle doğru (yanıt = a + S·konsantrasyon) uydurur; eğim ve kesimi güven aralıklarıyla, r²'yi, artık standart sapması sy/x'i verir ve saptama ile nicelendirme sınırlarını eğriden türetir. Her standart geri hesaplanır, böylece düzey başına doğruluk denetlenebilir.
Tipik kullanımlar
- Miktar tayini, içerik tekdüzeliği ve dissolüsyon testi için UV/Vis, HPLC ya da floresans kalibrasyonu
- ICH Q2(R2) validasyon raporunun doğrusallık ve aralık bölümleri
- Günlük eğrilerin denetimi: eğim kayması, kesim sapması, tekrar standartlarının RSD'si
Çıktı nasıl okunur?
- r² tek başına doğrusallık değildir. Artık-% grafiğine bakın: sistematik eğrilik aralığın çok geniş olduğuna ya da dedektörün doyduğuna işaret eder. r² ≥ 0,99 yaygın bir kabul değeridir, kanıt değil.
- Kesim testi: kesim sıfırdan anlamlı farklıysa tek noktalı kalibrasyon ya da "yanıt faktörü" ile nicelendirme düşük konsantrasyonlarda yanlı olur.
- LOD = 3,3·σ/S, LOQ = 10·σ/S; σ = sy/x (ICH Q2(R2) "yanıtın standart sapması ve eğim" yaklaşımı). Bunlar tahmindir; ICH, LOQ'nun o düzeyde standartlar analiz edilerek kabul edilebilir kesinlik ve doğrulukla doğrulanmasını bekler. σ olarak kesimin standart sapması da kullanılabilir; burada artık SD tercih edilmiştir çünkü konsantrasyon aralıklarına bağlı değildir.
- Geri hesap doğruluğu: düzeyleri işaretlemek için FDA/EMA biyoanalitik sınırları (±%15, en düşük standartta ±%20) kullanılır; farmakope miktar tayini yöntemleri genellikle daha dar uyum ister.
- Tekrar RSD'si düzey başına tekil standartlardaki kesinlik sorunlarını gösterir.
Ön şartlar ve kısıtlar
- Çalışma aralığının %80–120'sini kapsayan en az üç, tercihen beş ya da daha çok konsantrasyon düzeyi (ICH Q2(R2)); tekrarlar ayrı satırlara
- Aralık boyunca sabit varyans. Artık-% grafiği huni gösteriyorsa ağırlıklı (1/x, 1/x²) regresyon daha uygundur; bu araç yalnız ağırlıksız OLS uydurur
- En düşük standardın altına, en yükseğin üstüne ekstrapolasyon yapmayın
Kaynaklar: ICH Q2(R2) Validation of Analytical Procedures (2023); Miller J.N., Miller J.C. (2018) Statistics and Chemometrics for Analytical Chemistry, 7. bs., Pearson; Shrivastava A., Gupta V.B. (2011) Chron. Young Sci. 2:21–25, doi:10.4103/2229-5186.79345.